WB，Western Blot，蛋白免疫印迹，抗体

NC膜、PVDF膜的选择 western blot 中膜的选择是实验成功的关键点，Western blot实验中一般可以选择硝酸纤维素膜(NC) 和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么区别呢？怎样才能选择最恰当的杂交膜进行Western blot实验呢？ NC膜 PVDF膜 尼龙膜的特点 解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型;硝酸纤维素膜(NC膜)是目前应用最广的一种固相支持物，价格…

细胞蛋白是指的不是在细胞膜上就是在细胞里面，包括细胞质蛋白和细胞核蛋白，还会涉及胞浆蛋白和胞核蛋白的提取，所以我们提取蛋白的第一步是瓦解细胞膜，让蛋白释放出来，第二步才是提取蛋白，提取蛋白就包括是总蛋白还是核蛋白，第三步就是蛋白定量。 第一步是裂解细胞，目前细胞裂解细胞有反复冻融法、超声波处理法、裂解液处理法等。由于反复冻融法、超声波处理法在一定程度上会影响到细胞蛋白的完整性，所以目前用的最多的是…

“我的WB又没有杂出来，太桑心了” “哇靠你的WB又没有杂出来，用掉多少抗体了，还买进口的！” “哇靠你的WB又没有杂出来，却一直一轮又一轮的占用着蛋白电泳仪，我等到黄花都谢了！” 麦子说，这些声音贯穿了她整个研究生生涯，WB，虐了她无数遍，然而凤凰涅盘然后浴火重生，她从WB中参悟到了正确应对失败的人生道理。而在正确应对失败的同时，我们也要学会如何避免失败。小鱼今天给大家分享一下在用磷酸化抗体做W…

1.确定样本中磷酸化蛋白的表达量 对的样本，正确的处理方法和合适的阳性对照是实验成功的第一步。 对的样本：实验前需先查阅文献或通过预实验检测该样本是否表达，若该样本根本就不表达目的蛋白，那就不要浪费感情了吧； 正确的处理方法：若正常情况下样本的磷酸化水平过低或不表达，可通过物理或化学方法进行一定的刺激和诱导，刺激条件各不相同。但这并不代表刺激越多越好，充分但不过分（如磷酸化IRS1，仅需刺激5mi…

  abcam是世界上最大的高品质抗体供应商之一，成立于1998年，总部位于英国的剑桥科学园，专门生产和分销研究型抗体，已有差不多十余万种抗体和试剂，并以每月上百种新产品的速度不断增加。在2012年，abcam 并购了美国的 Epitomics 公司，成为一家有领导地位的 RabMAbs® 供应商。 当搜索abcam网站，您会发现对于任何一种给定的目标抗原，都有不止一种有效抗体。如何筛选…

说到抗体，学生物的小伙伴再熟悉不过啦，选择的抗体是否合适、抗体的质量优劣都关乎实验的成败。下面将从高品质抗体的选择、验证数据对抗体的重要性及内参抗体的选择标准等方面给大家一些建议。 1 质量是甄选优质抗体的首要标准 市面上常见的抗体有进口品牌、国产品牌、进口品牌国内分装这几种类型。大部分进口品牌在抗体的质量、特异性、效价及保存条件方面较有保障。而有些国产品牌的抗体，在做Western Blot时，…

内参抗体种类很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Lamin B等，那么针对自己的实验，我们该如何选择呢?下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则： 一.样本种属来源： 首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。 1、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。 2、植物来源实验…

蛋白免疫印迹（western blotting）一般由凝胶电泳、样品的印迹和免疫学检测3个部分组成，是根据抗原抗体特异性结合检测样本中某种蛋白的方法，与ELISA不同的地方在于WB是一种半定量的检测方法。操作流程如下： 下面详细介绍一下每个操作步骤：   一、样本的制备   （1）样本一般是组织和细胞，根据样本类型的不同，选择合适的裂解液： 样本类型 裂解液 全细胞 NP-40、RIPA 细胞质（…

上次跟大家分享了一个做WB的小技巧如何做出简简单单的WB背景？今天我们来接着分享。 刚开始做WB遇到很多问题，可能刚开始接触WB的小白们也能会遇到，借此分享一下，有不对的地方请WB前辈指教。 1. 洗板：大多数都是经费紧张闲杂物品能不买就不买的对吧，所以玻璃板大家都是怎么晾干的呢。专门的晾干架我们肯定是不会买的，因为有师姐传承下来的神器，随意增减空位，不够可以无限量自制。相信大家一看图就明白怎么做…

做了两年半的Western blot，真的是遇到了太多不可思议的、解决不了的问题，犹记得刚进实验室的时候，学会了WB像是学会了全世界，殊不知这只是科研实验的一块小砖头，如今快要毕业了，还在每天跑着WB补实验。今天在这里跟大家分享一些做WB 的小窍门，能让你节省时间，跑出完好看的条带。   一、蛋白提取 1、不管你提取的是组织蛋白还是细胞蛋白，RIPA裂解液和PMSF都是必不可少的使用试剂。常规情况…