磷酸化
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当我们在用磷酸化抗体做WB时,应该注意什么?
“我的WB又没有杂出来,太桑心了” “哇靠你的WB又没有杂出来,用掉多少抗体了,还买进口的!” “哇靠你的WB又没有杂出来,却一直一轮又一轮的占用着蛋白电泳仪,我等到黄花都谢了!” 麦子说,这些声音贯穿了她整个研究生生涯,WB,虐了她无数遍,然而凤凰涅盘然后浴火重生,她从WB中参悟到了正确应对失败的人生道理。而在正确应对失败的同时,我们也要学会如何避免失败。小鱼今天给大家分享一下在用磷酸化抗体做W…
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磷酸化抗体使用建议,听听CST专家怎么说?
1.确定样本中磷酸化蛋白的表达量 对的样本,正确的处理方法和合适的阳性对照是实验成功的第一步。 对的样本:实验前需先查阅文献或通过预实验检测该样本是否表达,若该样本根本就不表达目的蛋白,那就不要浪费感情了吧; 正确的处理方法:若正常情况下样本的磷酸化水平过低或不表达,可通过物理或化学方法进行一定的刺激和诱导,刺激条件各不相同。但这并不代表刺激越多越好,充分但不过分(如磷酸化IRS1,仅需刺激5mi…