1. 什么是IMDM培养基?
IMDM培养基:Iscove's Modified Dulbecco's Medium(IMDM)是一种富营养的培养基,设计用于培养对营养需求较高的细胞类型。IMDM因其成分丰富,常用于培养哺乳动物细胞,尤其是造血干细胞、杂交瘤细胞和其他对营养需求较高的细胞。
2. IMDM培养基的主要成分是什么?
成分特点:IMDM含有高浓度的氨基酸、维生素、核苷酸、葡萄糖和其他生长因子。此外,它还包含硫酸亚铁、硒酸钠等微量元素,以及多种缓冲剂(如碳酸氢钠),支持细胞在CO2培养箱中稳定生长。
3. IMDM与其他培养基(如DMEM、RPMI 1640)的区别是什么?
营养复杂性:IMDM的营养成分比DMEM和RPMI 1640更加丰富,特别是增加了核苷酸和其他辅助因子,使其适合培养对营养要求极高的细胞。
应用范围:IMDM常用于培养原代细胞、造血细胞、杂交瘤细胞和其他需要复杂生长条件的细胞,而DMEM和RPMI 1640适用于一般性哺乳动物细胞培养。
4. IMDM培养基的储存条件是什么?
储存温度:IMDM应保存在2-8°C的冰箱中,避免反复冻融。
光敏性:如果IMDM培养基中含有酚红,应避免长时间暴露在光线下,以防止成分降解。
5. IMDM培养基中是否需要添加血清?
通常需要:大多数细胞培养需要添加胎牛血清(FBS)以提供生长因子和其他必需的营养物质。血清浓度通常为5-20%,但具体用量应根据实验需求调整。
6. IMDM中L-谷氨酰胺的重要性?
L-谷氨酰胺的作用:L-谷氨酰胺是细胞增殖和代谢所需的重要氨基酸,但在培养基中不稳定,容易降解。为保持IMDM培养基的稳定性,建议使用稳定的替代品,如GlutaMAX。
7. 如何应对IMDM中的pH变化?
CO2环境:在5% CO2的培养环境中,IMDM的碳酸氢盐缓冲系统可以有效维持pH稳定。
及时更换培养基:如果发现培养基颜色变黄(表明pH值降低),应及时更换培养基。
8. IMDM适用于哪些细胞类型?
常见适用细胞:IMDM广泛用于培养造血干细胞、杂交瘤细胞、胚胎干细胞、T细胞、B细胞等营养需求高的细胞类型。
9. 如何处理IMDM培养基的污染?
避免污染:操作中应严格遵守无菌技术,使用无菌过滤器(0.22 µm)过滤培养基,以减少污染风险。
应对措施:如果发现培养基污染,应立即丢弃污染的培养基,重新制备并确保无菌操作环境。
10. IMDM培养基的常见应用有哪些?
常见应用:IMDM常用于细胞生物学研究、杂交瘤细胞生产、造血细胞培养、干细胞研究和基因研究中,特别适合需要复杂营养支持的细胞系。