免疫组化

在《Biacore检测蛋白与小分子相互作用的常见问题（上）》中我们着重介绍了在实验设计以及样品准备方面的问题，在本文的下篇中，我们还是从智荟专线收集的客户咨询出发，将继续讨论在实验进行过程中和最终的数据分析阶段可能遇到的常见问题，并逐一揭开上篇中遗留的各个悬念…… 一、 关于溶剂校正的问题 溶剂校正流程贯穿于前期的样品准备、之后的样品检测以及最后的数据分析，是检测蛋白与小分子相互作用实验中非常关键…

“ 抗原修复是IHC的成败关键。” 在以前的推文中，小编已经把免疫组化(IHC)的实验步骤、细节、常见问题以及IHC图像分析都介绍了(详见往期内容)。IHC实验的大致框架基本完成。今天，小编想就IHC实验中抗原修复环节聊聊，因为这个环节太重要了，不得不详细说明。此外，小编还想给大家推荐一个专业的网站，供大家日常学习和参考。 01　抗原修复的重要性 抗原修复为什么这么重要呢？ 首先，由于甲醛固定导致…

免疫组织化学（简称免疫组化）是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。 实验过程包括切片制作（固定，脱水，透明，包埋，切片，贴片，烤片），脱蜡，水化，阻断，抗原修复，封闭，一抗孵育，二抗孵育…

  免疫组织化学（IHC）是许多实验室的主要免疫测定方法，用于证明重要蛋白质的存在与否，检测翻译后修饰，诊断疾病等等。IHC使用免疫学和生化技术，通过与目标抗原相互作用的标记抗体来检查不同的组织切片。可见标记或染色剂用于可视化抗体抗原相互作用。IHC可以可视化细胞的独特细胞成分，广泛被病理学家和诊断人员使用。 实验前 1、样品制备 在室温下，用2%多聚甲醛将新鲜解剖的组织( 用流动的自来…

很多时候，我们千辛万苦地染出了一张张漂亮的免疫组化片子。但是却不知道如何正确地分析，得出理想的结果。这实在是一件憾事。其实，免疫组化的protocol教科书和实验手册上面都有。不再重复了。这里，中洪君根据自己做免疫组化数年的经验和体会，谈谈应该注意的一些事项和技巧，并且有独门绝招献上。 免疫组化实验步骤 1.  石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分…

基本原理 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。 分类 1、免疫荧光方法 最…

免疫组化，病理学实验的常用技术，看似容易，其实处处存在陷阱，稍微一不留意，就会掉入坑中而无法自拔。中洪免疫组化小王子：“是这个理，今天我就豁出去，将我多年的心得和经验奉献给你了！” （请耐心花2分钟阅读完本文，建议推荐给小伙伴一起学）  1 原理 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，…

来源于体外诊断技术支持 在临床病理诊断中，免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段，从20世纪70年代开始，免疫组化技术就应用于病理诊断，对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响，同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识，提高了病理诊断与研究水平。但是，随着免疫组化的广泛应用，发现免疫组化技术存在一些局限性。深入研究免疫组化原理和技术，必须熟悉各种抗体真阳性反应部位，实现实验…

“我的WB又没有杂出来，太桑心了” “哇靠你的WB又没有杂出来，用掉多少抗体了，还买进口的！” “哇靠你的WB又没有杂出来，却一直一轮又一轮的占用着蛋白电泳仪，我等到黄花都谢了！” 麦子说，这些声音贯穿了她整个研究生生涯，WB，虐了她无数遍，然而凤凰涅盘然后浴火重生，她从WB中参悟到了正确应对失败的人生道理。而在正确应对失败的同时，我们也要学会如何避免失败。小鱼今天给大家分享一下在用磷酸化抗体做W…

1.确定样本中磷酸化蛋白的表达量 对的样本，正确的处理方法和合适的阳性对照是实验成功的第一步。 对的样本：实验前需先查阅文献或通过预实验检测该样本是否表达，若该样本根本就不表达目的蛋白，那就不要浪费感情了吧； 正确的处理方法：若正常情况下样本的磷酸化水平过低或不表达，可通过物理或化学方法进行一定的刺激和诱导，刺激条件各不相同。但这并不代表刺激越多越好，充分但不过分（如磷酸化IRS1，仅需刺激5mi…