肿瘤细胞的主动运动是肿瘤进行转移的重要过程。肿瘤细胞在原发性肿瘤中迁移进入血管系统（侵袭和转移），但也需要主动成形以在新的宿主组织中离开血管内空间（外渗）。研究表明，肿瘤（和正常组织）细胞的定向或随机定向运动受pH调节影响。许多研究表明，如果细胞在中等酸性的pH（≈6.7）下培养，肿瘤细胞迁移增加。
那么，这种现象是通过什么实验观察到的呢
- time-lapse microscopy
- transwell
- wound healing
这里聊一聊transwell实验
Transwell检测细胞迁移步骤
1. 饥饿处理细胞
2. 铺胶：将基质胶适当稀释，铺在上层小室中，聚合过夜。
3. 铺下室培养基：含20%FBS的培养基。
4. 制备细胞悬液：胰酶消化细胞，制备细胞悬液。
5. 铺细胞：将上层小室放入孔板中，细胞计数后将细胞铺在上层小室中。
6. 继续培养：细胞培养箱中培养，通常24或48h。
7. 擦去上层细胞：用棉签擦去上层小室中的细胞和基质胶。
8. 固定细胞：4%多聚甲醛固定20min。
9. 染色与拍照：结晶紫或吉姆萨染色后拍照。
实验注意事项
基质胶注意事项
1. matrigel matrix成固态，液面水平。
2. 整个matrigel matrix只能分装一次，在分装前，要先放在4℃冰箱（最好先把matrigel matrix插在冰上，然后放入4℃冰箱）一段时间使其液化，且分装用的枪头，EP管等都要提前-20℃预冷（因为基质胶在10℃以上即会发生成胶凝固导致基质胶报废），整个分装过程要在冰上进行。
3. 实验人员的手心不要接触基质胶，如手持装有胶的EP管的上方，防止提问使基质胶成胶凝固。
4. 普通的matrigel matrix的浓度是8-12mg/ml，高浓度的是18-22mg/ml。
