1.给予细胞瞬时转染。24h后，PBS洗涤两次，消化，离心，去除培基，加入无血清的空培，重悬，计数。
2.8um孔径聚碳酸脂微孔滤膜的Boyden小室预先涂抹好50ul 1:40 RPMI-1640稀释的人工基质Matrigel胶，此操作应全程在冰上进行，因基质胶于室温下容易凝固。
3.预处理好的Boyden小室应置于37℃孵箱中凝固2h，使用前紫外线照射2h杀菌并加入适量无血清培养基，置于孵箱内继续孵育2h水化。
4.吸出上室内用于水化的无血清培养基，调整细胞密度，于每个Boyden小室内加入200ul细胞悬液，内含2×105个细胞。下室内加入600-800u含20％血清的完全培养基，其中的血清对上室的细胞可形成趋化作用。37℃孵育24-72h不等，根据不同细胞株的穿膜时间自行调整。
5.终止孵育，取出Boyden小室，用棉花轻轻擦拭上室，清理掉基质胶及没有成功穿膜的细胞。
6.PBS清洗5次后将Boyden小室浸泡在多聚甲醇中固定30min。
7.PBS清洗3次，苏木素染色约30min，流水轻轻冲洗小室。
8.显微镜下观察穿过膜的细胞，20倍镜下随机取上、下、左、右、中心5个视野拍摄照片。计算5个视野中细胞数目的均值，代表成功侵袭的细胞数目。
