在之前的教程中，介绍了怎么对细胞核进行自动细胞计数：传送门
细胞核之间的重叠部分，可以利用Watershed进行打断。
但这种方法只适用于较规则的椭圆形，例如细胞核等。
如果遇到不规则的细胞，例如下图的细胞，如果想要对细胞之间进行分割，并测得细胞面积和数量，之前的方法就不再适应了。
这篇文章会介绍一种对不规则细胞进行分割以及计数的方法。将单个细胞分割之后，可以测量单个细胞面积、细胞取向和荧光强度等参数。
该方法对图片有一定要求，重叠的细胞不能过多，且照片需要是荧光照片：
理论上，细胞之间越分散，分割效果越好。
1、确定细胞位置（Process -> Find Maxima...）
打开图像后，点击Find Maxima...
勾选Preview point selection，调节Prominence的值，直到每个细胞有且仅有一个标记点。
下图中可以看到，当Prominence>60时，总共有86个局部最大值，该值即为细胞总数。
Output type选择Segmentated Particles，点击OK即可得到Mask-1：
Mask-1的作用是确定细胞的大致位置区域，每个区域的边界可以作为细胞之间的界限。
2、反转图像（Edit -> Invert）
3、设定阈值确定细胞轮廓（Image -> Adjust -> Threshold）
打开原始图片，转换成8-bit（Image -> Type -> 8-bit）。调整阈值，框选出细胞轮廓。
然后单击Apply，转换成二值化图像，得到Cell shape：
4、图像相减（Process -> Image Calculator...）
利用图像计算工具，将Cell shape减去（Subtract）Mask-1，可将粘连的细胞分割开来：
6、自动分析、计数细胞（Analyze -> Analyze Particles）
设置适合的Size下限，以去除微小颗粒的影响，例如这里我选择的下限是150。点击可得如下结果：
该方法对图像的要求比较高，且结果的好坏和参数的设置是密切相关的。操作过程中需要多尝试，以找到分割效果最好的参数。
