培养基
培养基是培养环境中最重要的组成部分,因为它为细胞生长提供了必要的营养、生长因子和激素,并调节培养物的pH值和渗透压。
尽管最初的细胞培养实验使用从组织提取物和体液中获得的天然培养基进行,但对标准化和培养基质量的需求不断增长,促进了化学成分确定的培养基的发展。培养基的三个基本类别分别是基础培养基、减血清培养基和无血清培养基,三种培养基对血清添加的要求有所不同。
基础培养基
大多数细胞系在含有氨基酸、维生素、无机盐和碳源(例如葡萄糖)的基础培养基中生长良好,但在这些基础培养基的配方中必须进一步添加血清。
减血清培养基
在细胞培养实验中,减少血清不良影响的另一种策略是使用减血清培养基。减血清培养基是富含营养物质和动物源性因子的基础培养基配方,可减少所需的血清量。
无血清培养基
无血清培养基(SFM)通过用适当的营养和激素配方替代血清,避免了使用动物血清的问题。无血清培养基配方适用于许多原代培养物和细胞系,包括用于生产重组蛋白的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系、各种杂交瘤细胞系、昆虫细胞系Sf9和Sf21(草地贪夜蛾)以及用作病毒生产宿主的细胞系(例如293 、VERO、MDCK、MDBK等)。使用无血清培养基的主要优势之一是,能够通过选择生长因子的适当组合使培养基对特定细胞类型具有选择性。下表列出了无血清培养基的优点与缺点。
• 成分限定程度增加
• 性能更加稳定
• 更易于纯化和下游处理
• 生产率提高
• 细胞功能的精确评价
• 更好地控制生理反应
• 细胞介质的增强检测
缺点:
• 对特定细胞类型培养基配方有所要求
• 试剂纯度要求更高
• 生长放缓
细胞培养基最佳实践方案
下面是一些简单的提示和技巧,可以帮助您确保细胞培养基保持最佳性能。
SPERIKON提供各种经典的培养试剂,如胎牛血清、基础培养基、无血清培养基,以及抗生素和消化试剂等,供您进行细胞培养实验。
作为生长和附着因子、激素、脂质和矿物质的来源,血清对于在基础培养基中进行的细胞培养至关重要。此外,血清还调节细胞膜的通透性,且是脂质、酶、微量营 养素和微量元素进入细胞的载体。尽管可以获得并利用其他动物血清(例如马、 兔、山羊、猪等),但胎牛血清(FBS)仍然是使用最广泛的血清。与小牛和成年牛血清相比,FBS含有少量的丙种球蛋白、较高水平的生长因子和较少的补体蛋白。这使得FBS非常适合于促进增殖细胞生长,同时也降低了哺乳动物细胞在培养物中结合或裂解的可能性,从而成为FBS优先于其他动物血清的合理理由。然而,在培养基中使用血清存在一些缺点,包括成本高,标准化、特异性和差异性方面的问题,以及对某些细胞培养物的不良影响,例如刺激或抑制生长和细胞功能。如果血清的来源不可靠,污染也会对成功的细胞培养实验构成严重威胁。