细胞样本裂解方案

Elisa（酶联免疫吸附测定）是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。样本的处理对实验来说比较重要，那么我们今天来探讨一下细胞样本是如何处理的。

01 贴壁细胞裂解方法

单层贴壁细胞总蛋白的提取：
1	倒掉培养液。
2	每瓶细胞加5ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。
3	按1ml裂解液加10 μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。）
4	每瓶细胞加400 μ 含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。
5	裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml离心管中。（整个操作尽量在冰上进行。）
6	于4℃下12000rpm离心5min。（提前开离心机预冷）
7	将离心后的上清分装转移倒0.5min的离心管中放于－20℃保存。

02悬浮细胞裂解方法

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1	培养1×10⁶-1×10⁷个细胞；
2	将细胞转移到15ml圆形离心管，4℃, 500g离心5min；
3	小心去除上清，加入5ml预冷PBS重悬细胞，4℃, 500g离心5min；
4	尽可能多的去除上清，小心不要碰到细胞沉淀。
5	在上步骤获取的细胞中，加入200ul ProcartaPlex Cell Lysis Buffer。
6	吹吸混匀8-10次，冰上孵育5min；
7	将所有细胞转移到1.5ml离心管；
8	4℃, 14000g（离心机最大转速）离心10min；
9	将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或者保存在-80℃。
10	按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入25ul细胞裂解液和25ul Universal Assay Buffer。

可选步骤：

建议细胞裂解后上清进行蛋白定量检测。我们推荐使用BCA蛋白法含量检测试剂盒。建议将所有样本使用预冷的ProcartaPlex Cell Lysis Buffer调整样本蛋白浓度方为4-8 mg/ml。