HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）是一种氢离子缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2。我们在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。它是一种弱酸，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。既然我们常用于细胞培养液中，那它在细胞培养液中有哪些优势呢？
大多数细胞所需pH在 7.2-7.4，但细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同，成纤维细胞喜欢较高pH（7.4-7.7），而传代转化细胞系则需要偏酸pH（7.0-7.4）。HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH7.2-7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值，在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。
利用HCO3和CO2缓冲对的培养液 pH值不稳定，储存一定时间后容易偏碱。如果培养液的 PH变化太快，就可以在培养液中加 HEPES缓冲液至10--25mM的终浓度;它可以长时间保持恒定的PH，为细胞培养者们所喜爱。
HEPES与其他缓冲剂相比，它的分解常数随温度变化不大，这使HEPES缓冲液成为在低温时可较好地保持酶的结构和功能的缓冲液。
但值得我们注意的是，当HEPES暴露于光线中时，会产生H2O2，这对培养的细胞或其它有生物活性的物体产生毒性，因此HEPES作为缓冲液的操作应尽量在避光条件下进行。
