在检测中,0通常被赋予“无”和“阴性”的含义而1通常被赋予“有”和“阳性”的含义。从0到1不仅仅是值的变化,还预示着量变到质变。很多人对0有着不切实际的追求。
大家的普遍认知是实验室检测阳性的结果就一定是感染,检测结果是阴性就一定是未感染,如果检测结果和实际不符那么一定是检测的有问题。我在工作前几年,也认为只要实验体系完整,仪器试剂正常,操作规范那么得到的结果阳性就是阳性,阴性就是阴性。但是实际上没那么简单。
检测是在一个检测系统下获得的测量结果。决定检测结果的有两个重要要素:测量系统的LOD和获得该结果的概率。
1,检测系统的LOD
每个检测系统包含检测所有环节得到的结果,一种方法是前面章节提到的“不低于95%的置信区间区别于0的最低检测浓度。”这种方法比较适用于评价qPCR这类定性检测方法,除此之外LOD的确定还有很多其他方法:
基于空白样品的标准偏差计算
LOD = Mean blank + 3.3 * Stdev blank (one sided 95% * 2)
基于仪器信噪比(Signal to noise)
3倍信噪比为LOD
对于qPCR方法只用第一种方法就可以了。对于每一个检测系统只有高于其LOD才能称为有效检出,低于LOD的检测不出或称不能有效检出。在实际检测中对于我们目前使用的商品化的试剂盒以及我们每个实验室的检测系统,我们的LOD是多少?2个拷贝还是5个拷贝?如果这个问题都回答不了,对LOD浓度附近的所有检测,结果都是不可靠的。
2,获得检测结果的概率
每一次的检测如果是一个独立事件,那么每一次检测的结果都是在一定概率下的检测结果,这个概率可能是90%或者95%等。这个概率一方面跟检测系统的诊断敏感性和特异性有关,另一方面跟我们检测系统的误差有关,对于低浓度的样品还与泊松分布有关。
如此看来实验室检测是一个如此不靠谱的行为,我们还有必要去做吗?当然要做!天气预报也是根据概率进行预报的,我们要不要信呢?这个世界上没有绝对准确的事物,如果我们能计算出一个事物不准确的概率,就已经接近了绝对准确。
回到检测上面,首先我们要做的是评估检测系统的LOD。在临床上,对于单一样品的一次检测,会有一定的概率无法得到真实值。我们可以采用多次重复,多次采样检测,多点采样检测,不同时间采样检测,密切接触群体采样检测等方法获得更加准确的结果。
来源:原博士带你做检测